如何選用適合自己的
分光光度計?一般我們主要從光學(xué)構(gòu)造、光譜范圍、帶寬、樣品類型和分析工具這五個方面來考慮。下面就按這五個方面簡單說明一下。
就是光學(xué)構(gòu)造。分光光度計從結(jié)構(gòu)上來區(qū)分一般可分為單光束和雙光束分光光度計。何為單光束分光光度計,顧名思義,單光束分光光度計主要是依賴單束光進行測量。一束給定波長的光通過對照物,然后再通過實際樣品溶液,就能得到吸光結(jié)果。雙光束分光光度計一般是通過一個斬光輪將一束光分成兩束,分別測量對照樣品和實際樣品,可以實現(xiàn)小化光漂移并減少測量時間。但是其中一些雙光型光度計不利用斬光輪,而是利用一種光束分光器來代替,將一束光分成兩束平行的光然后同時測量對照樣品和目的樣品。因為增加了測量的速度,所以分光光度計在測量一些溶液隨時間動態(tài)變化的研究中大有用處。
其次就是光譜范圍。一般使用者考慮的是儀器需要比較大的靈活性,所以就得選擇更高性能的寬光譜儀器,紫外分光光度計一般覆蓋190nm和380nm波長,通常利用氘燈照明。一些特殊的儀器可以提供滿足光子學(xué)和半導(dǎo)體研究需要的光譜范圍。這些儀器具有多種光源供選擇:紫外光、可見光和甚至紅外光(780 nm 至3,000 nm)。鎢燈和鹵素?zé)粢话阒桓采w可見光部分(大約380 nm 到800 nm)。而氙燈則可以覆蓋紫外光和可見光區(qū)域。
其次則是帶寬。分光光度計的帶寬很大程度上依賴于單色儀的狹縫的寬度。調(diào)整狹縫的寬度則可以選擇投射出實驗要求的光譜。一種嚴(yán)格帶寬使得儀器能對復(fù)雜的混合物進行高分辨率的吸光測量。可變的單色儀的狹縫寬度能使一臺分光光度計滿足多種實驗需要。為了測量吸光值,分光光度計制造商通常使用光電倍增管和光敏二極管。光電倍增管可以提供快速的反應(yīng)時間和良好的靈敏度,并且可以在紫外光譜調(diào)節(jié)至特定的范圍。但一些制造商更依賴于光敏二極管的動態(tài)范圍在數(shù)秒內(nèi)行使所有的光譜測量。
還有就是樣品類型。在大部分的樣品類型中,分光光度計可接受樣品孔、小玻璃管、吸漿管和微孔板。微孔板主要是滿足高通量的需要和大規(guī)模的實驗室需求。但盡管對于小實驗室來說,制造商仍然提供了多種容器轉(zhuǎn)換器來滿足通量的要求和減少實驗時間。用小試管裝樣品容量一般從1μl-5ml,并且一些儀器裝備了各種樣品固定物來滿足各種改變需要。體現(xiàn)了很強的環(huán)境適應(yīng)性。
后就是分析工具。大部分單機型的分光光度計包含了驅(qū)動儀器運行和管理數(shù)據(jù)的軟件。高性能的儀器,通常與PC機一起聯(lián)用,需要從制造商提供額外的軟件。同時用戶也可以選擇升級軟件以滿足他們的需要。另外一個值得考慮的因素是數(shù)據(jù)的終使用。各獨立實驗室都有各自感興趣的實驗結(jié)果,也就有了不同的選擇。所以這也是需要考慮的一點。
下面要說的就是分光光度計在使用過程中需要注意的一些問題。
在分光光度計的使用過程中有這么幾點是需要注意的:
1)比色皿架及比色皿在使用中的正確到位問題。有些使用者對這個問題不夠重視,因操作不當(dāng)造成偶然誤差,嚴(yán)重影響分析結(jié)果。首先,應(yīng)保證比色皿不傾斜放置。稍許傾斜,就會使參比樣品與待測樣品的吸收光徑長度不一致,還可能使入射光不能全部通過樣品池,導(dǎo)致測試比準(zhǔn)確度不符合要求。其次,應(yīng)保證每次測試時,比色皿架推拉到位。若不到位,將影響到測試值的重復(fù)性或準(zhǔn)確度。還應(yīng)保證比色皿的清潔度,延長其使用壽命。
2)干燥劑的使用問題。干燥劑失效將導(dǎo)致a)數(shù)顯不穩(wěn)、無法調(diào)“0”點或“100%”點(電路或光電管受潮)。b)反射鏡發(fā)霉或沾污,影響光效率、雜散光增加。鑒于上述原因,分光光度計的放置地點應(yīng)遠(yuǎn)離水池等濕度大的地方、干燥劑應(yīng)定期更換或烘烤。
3)儀器的工作環(huán)境。應(yīng)避免陽光直射、避免強電場、避免與較大功率的電器設(shè)備共電、避開腐蝕性氣體等。
4)比色皿不能用堿溶液或氧化性強的洗滌液洗滌,也不能用毛刷清洗。比色皿外壁附著的水或溶液應(yīng)用擦鏡紙或細(xì)而軟的吸水紙吸干,不要擦拭,以免損傷它的光學(xué)表面。
5)為了防止光電管疲勞,不測定時應(yīng)將試樣室蓋打開,使光路切斷,以延長光電管的使用壽命。