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哈希1英寸方形比色池帶蓋DR2800樣品瓶美國HACH哈希1英寸方形比色池25ml帶刻度帶蓋DR2800樣品瓶
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哈希1英寸方形比色池帶蓋DR2800樣品瓶
品名:2612602 玻璃 帶蓋 測試瓶 25ml 2個\組 貨號:26126-02 包裝清單:26126-02(2支/盒) 重量:0.2kg/盒
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哈希1英寸方形比色池帶蓋DR2800樣品瓶
比色方法
一般有BCA,Bradford,Lowry 等幾種方法。
Lowry 法:以早期的Biuret 反應(yīng)為基礎(chǔ),并有所改進。蛋白質(zhì)與Cu2 反應(yīng),產(chǎn)生藍色的反應(yīng)物。但是與Biuret 相比,Lowry 法敏感性更高。缺點是需要順序加入幾種不同的反應(yīng)試劑;反應(yīng)需要的時間較長;容易受到非蛋白物質(zhì)的影響;含EDTA,Triton x-100,ammonia sulfate 等物質(zhì)的蛋白不適合此種方法。
BCA(Bicinchoninine acid assay)法:這是一種較新的、更敏感的蛋白測試法。要分析的蛋白在堿性溶液里與Cu2 反應(yīng)產(chǎn)生Cu ,后者與BCA形成螯合物,形成紫色化合物,吸收峰在562nm波長。此化合物與蛋白濃度的線性關(guān)系*,反應(yīng)后形成的化合物非常穩(wěn)定。相對于Lowry法,操作簡單,敏感度高。但是與Lowry法相似的是容易受到蛋白質(zhì)之間以及去污劑的干擾。
Bradford 法:這種方法的原理是蛋白質(zhì)與考馬斯亮蘭結(jié)合反應(yīng),產(chǎn)生的有色化合物吸收峰595nm。其的特點是,敏感度好,是Lowry 和BCA 兩種測試方法的2 倍;操作更簡單,速度更快;只需要一種反應(yīng)試劑;化合物可以穩(wěn)定1小時,方便結(jié)果;而且與一系列干擾Lowry,BCA 反應(yīng)的還原劑(如DTT,巰基乙醇)相容。但是對于去污劑依然是敏感的。主要的缺點是不同的標(biāo)準(zhǔn)品會導(dǎo)致同一樣品的結(jié)果差異較大,無可比性。
某些初次接觸比色法測定的研究者可能為各種比色法測出的結(jié)果并不*,感到迷惑,究竟該相信哪種方法?由于各種方法反應(yīng)的基團以及顯色基團不一,所以同時使用幾種方法對同一樣品得出的樣品濃度無可比性。例如:Keller等測試人奶中的蛋白,結(jié)果Lowry,BCA 測出的濃度明顯高于Bradford,差異顯著。即使是測定同一樣品,同一種比色法選擇的標(biāo)準(zhǔn)樣品不*,測試后的濃度也不*。如用Lowry測試細胞勻漿中的蛋白質(zhì),以BSA作標(biāo)準(zhǔn)品,濃度1.34mg/ml,以a球蛋白作標(biāo)準(zhǔn)品,濃度2.64mg/ml。因此,在選擇比色法之前,是參照要測試的樣本的化學(xué)構(gòu)成,尋找化學(xué)構(gòu)成類似的標(biāo)準(zhǔn)蛋白作標(biāo)準(zhǔn)品。另外,比色法定量蛋白質(zhì),經(jīng)常出現(xiàn)的問題是樣品的吸光值太低,導(dǎo)致測出的樣品濃度與實際的濃度差距較大。關(guān)鍵問題是,反應(yīng)后1011分光光度計的重要配件—— 比色杯的顏色是有一定的半衰期,所以每種比色法都列出了反應(yīng)測試時間,所有的樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)樣品),都必須在此時間內(nèi)測試。時間過長,得到的吸光值變小,換算的濃度值降低。除此,反應(yīng)溫度、溶液PH值等都是影響實驗的重要原因。此外,非常重要的是,是用塑料的比色法。避免使用石英或者玻璃材質(zhì)的比色杯,因為反應(yīng)后的顏色會讓石英或者玻璃著色,導(dǎo)致樣品吸光值不準(zhǔn)確。
細菌細胞密度(OD 600)
實驗室確定細菌生長密度和生長期,多根據(jù)經(jīng)驗和目測推斷細菌的生長密度。在遇到要求較高的實驗,需要采用分光光度計準(zhǔn)確測定細菌細胞密度。OD600是追蹤液體培養(yǎng)物中微生物生長的標(biāo)準(zhǔn)方法。以未加菌液的培養(yǎng)液作為空白液,之后定量培養(yǎng)后的含菌培養(yǎng)液。為了保證正確操作,必須針對每種微生物和每臺儀器用顯微鏡進行細胞計數(shù),做出校正曲線。實驗中偶爾會出現(xiàn)菌液的OD值出現(xiàn)負值,原因是采用了顯色的培養(yǎng)基,即細菌培養(yǎng)一段時間后,與培養(yǎng)基反應(yīng),發(fā)生變色反應(yīng)。另外,需要注意的是,測試的樣品不能離心,保持細菌懸浮狀態(tài)。
分光光度計的重要配件—— 比色杯
比色杯按照材質(zhì)大致分為石英杯、玻璃杯以及塑料杯。根據(jù)不同的測量體積,有比色杯和毛細比色杯等。一般測試核酸和紫外定量蛋白,均采用石英杯或者玻璃杯,但是不適合比色法測定。因為反應(yīng)中的染料(如考馬斯亮蘭)能讓石英和玻璃著色,所以必須采用一次性的塑料杯。而塑料杯一般不適合用于在紫外范圍內(nèi)測試樣品。
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